一、LC-MS背景介紹

T細胞受體（TCR）與人類白血球抗原（HLA）復合物呈現的肽段（peptide - HLA）的特異性識別，構成了人類T細胞免疫響應的核心機制。這種特異性識別對于抵御傳染病、調控自身免疫疾病、抗腫瘤作用以及腫瘤免疫治療至關重要。

HLA分為I類和II類兩大類：

• I類HLA廣泛表達于幾乎所有體細胞上，包括HLA - A，HLA - B，HLA - C，主要呈現長度為8至13個氨基酸的短肽；
• II類HLA主要在專職的抗原呈遞細胞上表達，包括HLA - DP、HLA - DQ、HLA - DR，呈現較長的肽段。

虎賁生物也提供HLA分型檢測,HLA 四聚體，點擊文字即可跳轉。

研究HLA呈遞抗原，在基礎研究和臨床治療上都有重大意義。

HLA抗原的發現，與TCR測序的結合，在研發腫瘤特異性TCR中至關重要：

• 發現抗原肽后，可采用抗原肽對病人，健康人的血液進行刺激，以獲得高特異性T細胞。
• 抗原肽發現結合四聚體、多聚體的制備技術，可以快速完成從病人和健康人中篩選抗原特異性TCR。
• 對病人病灶組織和健康組織的檢測，能發掘該病人和該病人群體的特異性抗原，以及新抗原，為該病人和該類病人的治療方法提出指導和建議。
• 在細胞治療外，靶點的發現也能應用于腫瘤疫苗和其他關于自身免疫藥品的研發。

質譜抗原檢測法是目前最直觀，最真實的檢測法。相比起NGS結合軟件預測的方式， 質譜法的結果最可信也最精確。尤其是對于某個抗原，能直接體現其豐度，即細胞表面真實表達HLA - 抗原豐富程度。能極大的幫助研究者和醫生選擇更有可能成功的免疫治療方法。

此外，質譜法還能檢測到抗原的翻譯后修飾，如氧化，磷酸化，脲甲基化等，這些信息通過核酸測序無法獲取。

二、技術路線

左圖展示了通過液相色譜 - 質譜聯用技術（LC - MS）從細胞中提取并分析MHC（主要組織相容性復合體）肽配體的過程。整個流程可以分為幾個主要步驟：

組織細胞處理與裂解

• 細胞首先被清洗以去除組織間的雜蛋白和其他分子。
• 通過溫和的細胞裂解釋放細胞表面的pHLA。

免疫捕獲

• 使用特異性抗體固定在固相基質上來捕獲pHLA分子。有效地從復雜的細胞裂解液中富集pHLA分子。
• 經過多次清洗去除非特異性結合的蛋白質和雜質。
• 從固相基質中釋放pHLA。

去蛋白化與脫鹽

• MHC分子通常與肽配體及β2微球蛋白（β2M）復合體形式存在。分解蛋白質復合體，釋放肽配體。
• 去除樣本中的鹽分，為LC - MS分析做準備。

LC - MS分析

• 干凈的肽樣本通過色譜柱分離不同的肽段。
• 分離后的肽段被引入質譜儀進行質譜分析，檢測和識別肽段的質量和組成，通常結果以圖譜形式展示，每個峰代表一個特定的肽段。

三、結果展示

2016 Ablin et.al.Immumity

虎賁部分測試結果整理

虎賁生物醫療的抗原捕獲技術能有效捕獲85 - 90%的樣本抗原。

國際知名周刊上相關類似實驗，每樣本收獲數據量約為1000 - 3000條多肽。虎賁生物醫療每次收獲的多肽范圍是1300 - 4500條。